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cdna浓度多少合适,影响cDNA浓度的因素

rna浓度太低可以做cdna吗 2023-12-18 12:58 573 墨鱼
rna浓度太低可以做cdna吗

cdna浓度多少合适,影响cDNA浓度的因素

cdna浓度多少合适,影响cDNA浓度的因素

不同品牌的反转录产物的cDNA浓度差异很大，但定量实验中的Ct值几乎相同。 反转录系统中dNTP输入量的不同会导致cDNA浓度的测定结果存在较大差异，但最终的Ct值几乎相同。 表1.纳米滴定量结果统计表。对于长片段PCR，建议将反应体系中的cDNA浓度稀释至1:10（或1:100-1:200）6.在没有逆转录酶的情况下，对照RNA扩增结果通常是由对照RNA中含有微量DNA引起的。 由于体外移植

这样得到的cDNA浓度应为100ng/ul。然后实时进行，多少cDNA合适？ 人们通常如何稀释它？ 这个很难说，一般都是稀释10倍，1微升做模板。不过我做了1-100ng/ul（工作浓度）的低拷贝基因。 浓度过低和过高都会影响放大效率，但不是绝对的。 因为有的基因表达量极低，有的基因在特殊情况下表达量极高。 qPCR通常只反映安全性

例如：如果要扩增某个处理组的GAPDH内参基因，则对反转得到的cDNA进行10倍梯度稀释。得到的cDNA浓度梯度为：100（原液）、10-1、10-2、10-3、10-4，我们在qPC上同时计算4个cDNA模板。例如，1OD260/280=33ug，RNA提取后测OD260/280=1.0，则CDNA浓度为

ˋ＾ˊ〉-# 一般为1-2ul，但有时可能需要稀释，因为反转录系统中的某些成分可能会干扰PCR系统中的特殊定量，如环状RNA。由于产物片段问题，上述浓度可能不适用。例如，上样量150ng的miRNA通常更合适。 。

∪△∪ cDNA长度的最佳钾离子浓度是140-150mM。 3.二价阳离子二价阳离子是逆转录酶活性所必需的。 低于4mMMg2+未观察到活性；产生全长转录本的最佳浓度一般为1-100ng/ul（工作浓度）。 浓度过低和过高都会影响放大效率，但不是绝对的。 因为有的基因表达量极低，有的基因在特殊情况下表达量极高。 qPCR经常

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