细胞LC3蛋表达量检测步骤,细胞的复苏详细步骤

细胞LC3蛋表达量检测步骤,细胞的复苏详细步骤

如图2所示，在甲状腺（Thyroid，firstrow）中，LC3Bi的表达水平不高，更适合检测LC3A。 因此，您需要根据您所使用的细胞系或组织使用适当的目标抗体。 当然，通过使用抗LC3A/B抗体，其次可以通过免疫印迹分析或流式细胞术定量观察细胞总LC3的量，或者通过荧光显微镜定性观察，其与自噬流成反比。

在半定量中，除了使用LC3-II/LC3-I的比例外，一些科学家还使用LC3-II与管家蛋白（HousekeepingProtein）的比例进行半定量。 图5CSTLC3A/B抗体#4108LC3条带的数量与样品本身有关。 2）WesternBlotto检测LC3和p62蛋白的表达水平①利用WesternBlotto检测LC3-II/I比率的变化来评价自噬形成（图3）。 当自噬形成后，细胞质的LC3-I会酶促消化一小段多肽，然后与PE结合转化为膜型。

3.WesternBlot检测LC3和p62蛋白的表达①利用WesternBlot检测LC3-II/I比值的变化来评价自噬形成情况（图1）检测自噬标志物LC3的要点。哺乳动物LC3蛋白的四种亚型（LC3A、LC3B、LC3B2和LC3C），其表达随组织或细胞类型的不同而不同。如图1所示，在甲状腺中（甲状腺，第一排），LC3Bi表达水平不高，检测L

A.正常培养的细胞自噬活性较高，可直接检测。B.激光共聚焦显微镜可直接观察自噬体的形成。C.可构建GFP-LC3质粒转染细胞。自噬形成后，单个时间点LC3-II表达的变化并不能反映细胞的自噬状态，需要使用一些药物阻断溶酶体降解（如氯喹、巴弗洛霉素A1等）来确定干预情况。 下降，细胞自噬程度的变化。 氯喹抑制溶酶体

1.检测LC3蛋白表达水平Westernblotting技术是比较常用的检测蛋白表达的方法。 SDS-PAGE电泳显示LC3-I的表观分子量为18kD，LC3-II的表观分子量为16kD。 自噬发展采用WesternBlot检测LC3的表达情况，采用WesternBlot检测LC3-II/I比值的变化来评价自噬的形成情况。 当自噬形成后，细胞质LC3-I会酶消化一小段多肽，然后与PE结合转化为膜型LC3-II。 因此它可以