coip孵抗体温度,用于ip的抗体浓度是wb的几倍

coip孵抗体温度,用于ip的抗体浓度是wb的几倍

(3)加入400μL上清至用裂解液洗涤3次的珠子中，加入0.3-0.5μg标记抗体，4℃孵育3-4小时；(4)4℃下2,000g离心3分钟，除去未结合的液体，使珠子停止沉淀，使用预冷的蛋白质b)如果没有特异性抗体，则需要考虑构建组合标签质粒并使用标签抗体进行CoIP实验；c)样本类型实验的风险：过表达的细胞样本<细胞样本<动物组织样本< 植物样本（一般是转基因植物，标签抗体也很

˙▽˙ 免疫共沉淀(Co-IP)是基于抗原和抗体之间的特异性相互作用来研究蛋白质-蛋白质相互作用的经典方法。 免疫共沉淀可用于检测两种已知蛋白质之间的相互作用，或使用相互作用蛋白质的特异性抗体检测相互作用，通过WesternBlotto确认两者之间相互作用的存在。 操作步骤：1.用预冷的PBS溶液清洗头部细胞两次（对于悬浮细胞，使用台式离心机，800-1000rpm。

13.14,000rpm短暂离心5秒，收集琼脂糖珠-抗原-抗体复合物，除去上清，用预冷的RIPA缓冲液洗涤3次，800μl/次，RIPA缓冲液有时会破坏琼脂糖珠-抗原-抗体复合物。复合物内关键试剂的选择：使用能富集蛋白质的抗体是前提因此，任何适合IP的抗体都可以用于Co-IP。 ·重点是低温热解，避免降解。 需要添加足够的抗体珠，并将抗体蛋白孵育过夜。 蛋白质丰度

11.将抗原抗体混合物缓慢摇匀，4°C室温过夜2小时。激酶或磷酸酶活性分析，建议室温孵育2小时。 )取10uL全蛋白作为Westernblot分析的输入，剩余样品中加入1μg相应抗体，4℃摇床过夜； 3,000rpm离心

⊙﹏⊙‖∣° 取决于所选的珠子。 一般来说，孵化时轻轻摇动（例如低速摇板）可以增加相互作用的机会。 1.收集孵育后，需要收集抗体/蛋白复合物，复合物和其他细胞蛋白应通过磁力或离心方法保持温度。为防止裂解液中蛋白质降解或变化，请在4°CCoIP下进行。 冷藏室是完美的，特别是如果您可以将所有设备（例如摇杆/离心机）放在触手可及的地方。 放弃