coip实验步骤,coip原理与实验流程

coip实验步骤,coip原理与实验流程

免疫共沉淀实验的一般流程如下：收集蛋白样品-诱饵蛋白抗体沉淀诱饵蛋白-SDS-PAGE分离蛋白-WB检测目标蛋白的存在。 实验步骤详细说明：1.总细胞液的制备①1.3目的蛋白Western检测（操作步骤省略）1：检测蛋白在细胞中是否表达2：检测目的抗体是否拉低目的蛋白1.4蛋白银染-质谱（操作步骤省略，按照相应银染试剂盒说明书使用即可）2

实验设备方法/步骤11.试剂准备1.预冷的PBS、RIPA缓冲液、细胞刮刀（包裹塑料包裹并埋在冰下）、离心机。 2.用预冷的PBS清洗细胞两次，最后一次吸干PBS。 3.添加预共IP实验步骤。免疫共沉淀实验步骤：1.转染质粒后48小时，用冰冷的1×PBS清洗293T细胞，加入1ml预冷的IP缓冲裂解液（含PMSF），并进行冰浴。 裂解细胞30分钟。 2收集1m内的细胞裂解液

≥▂≤ 免疫共沉淀（CoIP）概述和原理免疫共沉淀（CoIP）是研究蛋白质-蛋白质相互作用的经典方法，属于免疫沉淀技术的范畴，用于鉴定特定的蛋白质复合物【实验流程】一般每个IP样品需要200-500μl细胞裂解液，浓度约为1μg/μL。以下步骤以200μl细胞裂解液为例）1.将200μl细胞裂解液添加至20μlProteinA或ProteinGbeads浆液中，4°C

＞＾＜ CoIP实验通常包括以下步骤：1.准备细胞或组织样本：首先，需要准备含有目标蛋白的细胞或组织样本。 这些样品通常需要使用裂解缓冲液进行裂解以释放蛋白质。 2.康再次检查并发现另一个交货。 我有一个问题想问，就是提前知道这一步磁珠是否会吸收抗原，从而产生后续的结合

注意：此CoIP程序是首先将抗体与ProteinA/G-琼脂糖微球结合，然后将其与抗原混合。 与其他方法相比，最终得率较低，但避免了抗体共洗脱的问题。 3.实验步骤（1）总蛋白提取：将200uL蛋白提取物加入样品中，放入蛋白能量研磨机，低温研磨2分钟，4℃12000rpm离心15分钟，收集上清液，采用BCA蛋白定量法测得上清液中蛋白浓度为9.825mg/ml,约180