coIP提取buffer,double buffer

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预冷的PBS、RIPABuffer、细胞刮刀（包在塑料袋中，埋在冰下）、离心机1.用预冷的PBS洗涤细胞两次，最后一次干燥PBS；2.加入预冷的RIPABuffer（1ml/107个细胞，10cmRIPABuffer）配制：基本成分：Tris-HCl（缓冲液成分，防止蛋白质变性）NaCl（盐，防止蛋白质变性）-特定蛋白质聚集） NP-40(非离子去污剂，提取蛋白；用水配制10%储存液)脱氧胆

1.预冷PBS，RIPA缓冲液，细胞刮刀（用塑料包装包裹并埋在冰下），离心2.用预冷的PBS洗涤细胞两次，最后一次干燥PBS3.添加预冷的PBSRIPA缓冲液（1mL/107细胞，10cm培养皿150cm²培养烟草转化和CoIP方法6ng缓冲液或煮沸5分钟wb与60l1SDS加载缓冲液以检测flagver2蛋白是否与tagrp2gfp蛋白共沉淀，取洗脱的样品溶液和ubpw5并输入实验组对照组总共运行8个样品

①保留约20ul细胞裂解上清，加入2x上样缓冲液煮5分钟，作为输入组拾取珠子并确保每管中的珠子量（3）LiCl洗涤缓冲液-一次洗涤（4）TE缓冲液-两次洗涤4.清洗后，开始洗脱。 洗脱液配方：100ul10%SDS、100ul1MNaHCO3、800ulddH2O，共1ml。 每管添加250ulelutionbuff

1.取两支1.5mlEP管，每管加入400ul总蛋白，然后加入100ulRIPA裂解缓冲液，补充液500ul，一管加入5ug目标抗体，另一管加入5ugrabbitIgG，4℃旋转孵育过夜。 2.取2支1.5mlEP管，分装（2）超声处理，4℃离心12,000g30分钟，取上清400μL进行免疫沉淀，取上清80μL进行总蛋白等。 2Ⅹ上样缓冲液体积；(3)加入400μL上清液，用裂解缓冲液洗涤3次

╯﹏╰ 比如常用的标签有flag、HA、Myc等（不知道大家能不能理解并完成这一步，其实就是构建细胞过表达载体，转染到细胞中进行蛋白表达）2⃣️过表达48小时72后，提取细胞蛋白，建议使用NP2。预冷RIPA缓冲液（1ml/107细胞，10cm培养皿或150cm2培养瓶，0.5ml/5×106细胞，6cm培养皿，75cm2培养瓶）。 3.用预冷的细胞刮刀从培养皿中刮下细胞，并将悬浮液调至1.5