qPCR融解曲线高低,qpcr溶解曲线能得到什么信息

qPCR融解曲线高低,qpcr溶解曲线能得到什么信息

熔解曲线是通过PCR反应后逐渐升高反应溶液的温度并实时监测荧光染料的荧光信号的轻微变化来绘制的。 温度升高前，PCR产物形成双链结构，荧光强度信号较高。当温度逐渐升高时，双链DNA逐渐变为①Ct>35，熔解曲线Tm值<80℃（一般正常qPCR产物大小为100-100）。 300bp，熔解曲线大多在80℃以上），这可能是由于引物二聚体所致，而且引物还可以进一步优化。 ②如果有Ct值且<35，则表示反向

虽然通过实时荧光定量PCR反应后的熔解曲线可以检测产物的特异性，但其特异性明显劣于荧光探针检测，因此双链掺入法尚未得到临床认可。 2.Taq的缺点是成本高，定量检测时需要制作荧光标准曲线，PCR扩增过程可能会受到假阳性等多种因素的影响[44]。2.1.5甲基化敏感性和高分辨率熔解曲线法甲基化敏感

⊙▂⊙ ①Ct>35，熔解曲线Tm值<80℃（一般正常qPCR产物在100-300bpin大小之间，熔解曲线Tm大多在80℃以上），这可能是由于引物二聚体的原因，引物可以进一步优化。 ②若Ct值<35，则说明反应体系被污染。2.若熔解曲线为单峰但不尖锐，则可能存在大小相似的非特异性产物，可通过高分辨琼脂糖电泳证实。 3.熔解曲线为单峰，但Tm值在80℃之前。推测没有添加模板，仅添加引物二聚体。

虽然通过实时荧光定量PCR反应后的熔解曲线可以检测产物的特异性，但其特异性明显劣于荧光探针检测，因此双链掺入法尚未得到临床认可。 2.由于Taqman探针是双链掺入的，所以一个样品做了两个重复的孔，CT值相差不大。今天做的时候，注意多次混合反应液，熔解曲线很好。

qPCR产物的大小范围为75至200bp，其熔解温度约为80至85℃。 首先观察熔解曲线，如果出现非单峰，则说明发生了非特异性扩增。 此时观察峰的位置，如果熔解曲线为85℃，则说明随着反应温度升高，双链扩增产物逐渐熔解，荧光信号逐渐减弱。 原始熔解曲线荧光光谱如左图所示，对荧光值取负导数后，得到右图熔解曲线。