coip的input组,ip实验是什么意思

coip蛋白提取 2023-11-26 23:54 954 墨鱼

coip蛋白提取

coip的input组,ip实验是什么意思

＋▂＋输入组为阳性对照组。为了直接使用抗体FBX7（抗体YTHDF2）对细胞裂解物进行IB/WB检测，请验证细胞裂解物中是否存在蛋白质FBX7（蛋白质YTHDF2）。 IgG组，阴性对照。非特异性输入：阳性对照，使用A和B抗体对输入组进行WB检测。如有需要，请参见以下内容：CoIP检测-南京瑞源生物科技

从Input组的条带可以看出，ProteinA和Protein都存在，证明样品处理和蛋白质提取步骤没有问题。阴性对照IgG组和实验组平行进行免疫沉淀实验，结果显示蛋白A和蛋白B均无条带，说明采用上述对照是为了避免"假阳性"，称为阴性对照。除了Co-IP实验外，还将设置阳性对照组（输入组）。输入组直接使用抗体X（抗体Y）进行对细胞产物进行WB检测以验证细胞产物。

①取约20ul细胞裂解上清，加入2倍上样缓冲液，煮5分钟作为输入组②将琼脂糖珠（Sbeads）预先均匀分装到新的EP管中，用枪头剪掉，用枪头吸收珠子，#蛋白免疫沉淀#共IP过程（设置输入组和IP组）1.取出细胞（六孔板）37℃柜中，倒出培养基，将所需试剂置于六孔板中一次，每孔中加入5ml预冷的1×PBS（巴斯德管即可），所有操作一次完成。

ˇ▂ˇ 特别是当1P组中的抗体不具有足够的特异性，且样本中存在与目标蛋白结构、序列或性质相似的蛋白时，可能会导致一些不相关蛋白的特异误检。 INPUT样本质量问题：看INPUT样本图片的第三部分，也就是下面的部分。FLAG抗体和HA抗体用于检测全细胞的裂解物，作为阳性对照（有些文档会注明输入组），如下图：图中右侧的WCL代表整个细节

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