coip蛋白提取,细胞蛋白提取步骤

coip蛋白提取,细胞蛋白提取步骤

1.提取蛋白质。 2.向细胞裂解物中添加抗X抗体。 3.孵育后，添加ProteinA或G（在琼脂糖或磁珠等介质上）。 如果存在与细胞中感兴趣的蛋白质结合的目标蛋白质，则可以形成复合物："Yisoftenusedtoverifyiftwoknown蛋白质相互作用。实验流程实验步骤1.细胞蛋白质提取1.1细胞培养（海报壁细胞：100mm细胞培养皿中的单层细胞充满80％-90％细胞培养烧瓶中的细胞）

∩０∩ Tris-HCl（缓冲液成分，防止蛋白质变性）NaCl（盐，防止非特异性蛋白质聚集）NP-40（非离子去污剂，提取蛋白质；用H2Otoprepare10%保存液）脱氧胆酸钠（离子去污剂，提取蛋白质；用H2Otoprepare10%储备液表示蛋白质该条带代表使用蛋白质X进行沉淀实验，结果，蛋白质Xwa沉淀，蛋白质也沉淀。得到结果

(1)总蛋白提取：向样品中加入200uL蛋白提取液，置于蛋白粉碎机中低温研磨2分钟，4℃、12000rpm离心15分钟，收集上清液，用BCA蛋白定量法测定上清液的蛋白浓度为9.825mg/ml，约180uL。 (2)在非变性条件下从样品中提取蛋白质后，Co-IP得到的产物经过SDS-PAGE分离不同大小的蛋白质、蛋白质还原烷基化和酶水解，脱盐后的酶水解产物经过LC-MS/MS鉴定、数据库脱机数据检索和采集

Co-IP共免疫沉淀蛋白质相互作用分析方法的原理是利用抗原抗体相互作用拉低目标蛋白质来估计相互作用的蛋白质。 具体是将目的蛋白的抗体固定在亲和树脂中，然后加入适量的蛋白提取缓冲液（物质：提取液=1：1.5），孵育30分钟；蛋白提取缓冲液：试剂用量Tris-MES（0.5M，pH=8.0）10mLEDTA（0.5M，pH8.0）2mL蔗糖17.115（1M）0。1mlLDTT

∩ω∩ 1）总蛋白提取：①细胞样品制备：3000rpm离心5分钟收集细胞，PBS冲洗，加入适量改良RIPABuffer（含蛋白酶抑制剂），裂解30分钟，4℃，12000rpm离心20mi。阅读本文CoIP实验：原理、实验步骤、守护爱情，先了解如何相处。首先从CoIP的原理开始：免疫共沉淀是一种基于抗体和抗原识别特异性的方法，用于研究蛋白质相互作用。 经典食谱