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pcr扩增出现两条带 |
pcr结果出现多条带,PCR跑出多个条带
出现多条带说明PCR反应的特异性不高,可以进行以下优化尝试:1.适当提高PCR的退火温度。 退火温度越高,DNA分子空气停止在一起就越困难。 这样可以减少如果目标序列在引物和模板之间发生突变或删除,也会影响引物和模板的特异性结合,导致假阴性结果。 种草R][三R]非特异性条带扩增或条带拖尾现象-当引物特异性较差或引物形成二聚体时,可重置
在继续之前我要休息一天。 做了四天的PCR后,我发现这是一个错误。 我使用的制作者都是2000年。 PCR运行时,条带会积累在点样孔的末端,即2000*标记。PCR过程中,同一模板的前几孔以7个温度梯度运行,因为引物的Tm值差异较大,引物F的Tm值为65.8℃,引物Ri的Tm值为74℃。 模板提到RN
1.无扩增条带(1)酶无活性或反应体系中未添加酶。 TaqDNA聚合酶因储存或运输不当而失活。用新酶替换酶或使用其他来源的酶通常可以获得满意的结果。 2)模板含有杂质。 特别是甲醛固定的质粒,PCR后电泳出现多条带的最常见原因是:1)引物特异性不好;2)退火温度太低;3)PCR系统有问题。
1.引物设计问题:确保引物序列正确且与目标DNA片段特异性结合。 底漆可以被设计和实验。 2、DNA污染。众所周知,聚合酶链式反应(PCR)虽然特异性强、灵敏度高,但其优点也会放大我们操作过程中的一些小错误,导致PCR结果出现偏差。 超前的测试结果
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标签: PCR跑出多个条带
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通过这种方法,在PCR过程中,所期望的PCR产物得到有选择性的增加,同时保证很少或不发生非特异性扩增(图2)。图2:降落PCR该方法通过采用高于最佳退火温度的起始温度,之后随着循环逐渐降温(黑线),...
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可以啊,我反正是用PCR产物直接测序的,不过前提是你的条带比较单一,电泳条带比较亮,这样测出来结果比较好。如果你的条带不单一,建议还是先连载体,再测序。无...
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还有就是能长出菌落但是菌落PCR没有条带,或者测序的结果是空载或者无信号。以测序的结果为准,如果是有信号但不是重组质粒,那就是说明这是一个空的载体,同源重组的时候没有与目的片段...
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