qpcr曲线是锯齿状,荧光定量pcr溶解曲线图分析

qpcr曲线是锯齿状,荧光定量pcr溶解曲线图分析

(4)扩增曲线呈锯齿状且不连续。请参考上图。这是典型的ROX添加不当导致的异常结果，且曲线杂乱。 可以先尝试删除ROX分析数据，看重复性是否正常（图1扩增曲线基线设置不当，个别扩增曲线突然下降：反应管内有气泡，温度升高后气泡破裂，导致仪器检测到的荧光值突然下降。在进行扩增反应前，请仔细检查反应管是否正常

平台期扩增曲线线性图出现锯齿[可能原因]1.RNA纯度不好，杂质较多。 2.仪器使用时间过长。 【解决方案】1.重新提取高质量RNA。 2.稀释RNA模板以降低杂质浓度。 3.校准仪器。 放大曲线线性图。放大曲线呈锯齿状且不连续：ROX添加不当，需要修正参考染料。 2.反应结束时无扩增曲线。a.反应周期数不够：一般设置为40个，但需要注意的是，太多的周期会增加背景信号，降低背景信号。

结果：基线期间扩增曲线下降。 可能原因：基线范围设置不当。 建议：再次手动设置基线。 3.荧光信号采集结果异常：扩增曲线异常，出现锯齿状（或有熔解曲线但无扩增曲线）。 可能原因：荧光解决方案：可对基因扩增产物进行梯度稀释，同时进行qPCR，得到的标准曲线可用于计算引物扩增效率。 通过标准曲线可以得到线性方程，将线性方程得到的斜率（K）带入放大效率计算公式：

您可以拆下木板，制作一块1.5%的胶水，单击它并运行10分钟，看看条带是否明亮。 你的曲线确实有一定的值。仪器默认的峰值位置仍然是基线期。将峰值位置向基线方向下拉，使放大曲线变成倒S形（左图）。 您可以适当缩小基线范围，手动将基线终值调整为ct值-4，调整基线范围。

?０? 曲线拐点明显，尤其是指数相流量-浓度样品。放大曲线整体平行度良好。指数相曲线的斜率与放大效率成正比。斜率越大，放大效率越高。放大曲线异常1.放大曲线抖动三摇，(4)放大曲线呈锯齿状不连续，可以参考上图。这是典型的ROX添加不当导致的异常结果，曲线杂乱。 可以先尝试删除ROX分析数据，看重复性是否OK（多孔间STD<0.2），如果还是不行