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质粒提取浓度大概多少 |
提取出的RNA怎样测浓度,Qbuit测DNA浓度受RNA
用光度计测得的总RNA浓度和RNA纯度分别以OD260/280和OD260/230来解释。具体如下:Nanodrop2000用2μLDEPC水调整基线,取2μL不同方法提取的总RNA溶液,读取RNA浓度OD260/230。 280和260/230的比例,比例在1.8和2.0之间。使用Q公司的血浆DNA提取试剂盒提取血浆DNA。OD260/OD280一般在1.7-1.9之间;使用BiogplasmafreeDNA提取。
然后,生成竞争RNA的浓度曲线,并用于比较内源转录物产生的RT-PCR信号,以确定样品中存在的目标的吸光度值。计算提取的RNA的浓度和纯度,并在-80°超低温下保存。 保留在冰箱里。 58.Step3.cdna的合成59.使用提取的rna作为模板并使用primescripttmii第一链cdna合成器
步骤:RNA提取~RNA浓度测定~RNA反转录~实时荧光定量检测1.RNA提取:常用的三唑法(类似融合原理)所需使用的几种液体及其作用:知道了原理,就知道步骤了(为什么这样?)DEPC:采用D浓度:产品浓度检测常用方法包括紫外分光光度法米测量和量子比特仪器检测;PS:两者操作方便快捷,但不能区分降解的核酸;紫外分光光度计测试成本低,容易得到虚高的浓度值。 量子比特仪器测试
?ω? 1.RT前必须测量RNA浓度。反转录系统对RNA的量还是有一定要求的,常用的是500ng或1ug。 2.如果RT按要求进行,一般会出现较大问题。 3.PCR,正常。 但如果需要扩增片段,前两步的RNA浓度为1.016×40×10=406.4ng/ul。RNA纯度为1.016/0.533=1.906。此浓度和纯度适合PCR。 问题分析(1)蛋白质污染:确保不要吸入中间层和有机相。 减少起始样本
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