pcr扩增效率,荧光定量pcr结果怎么看

pcr扩增效率,荧光定量pcr结果怎么看

•高扩增效率（90-105%）•一致的重复反应确定qPCR实验是否优化的有效方法：将模板稀释成一系列PCR反应浓度梯度，并使用此结果创建标准曲线。 模板可以用已知的第一种方法来计算：第二种计算方法：都是通过标准曲线法来计算放大效率。其实，它们是一样的。根据定义，如果放大完成，1就变成2，2。 改为4线，放大效率为200%，但通常由软件计算

扩增曲线是指PCR过程中以循环数为横坐标，反应过程中的实时荧光强度为纵坐标的曲线。 一条优秀的扩增曲线应具有以下特点：基线平缓下降，无明显上升趋势；曲线有明显的拐点，指数相倾斜（1）PCR试剂的扩增效率不是100%（高或低），通常扩增效率低于100%。常见原因有酶活性不足、不合理等。引物和探针不合适，或反应溶液条件非最佳，导致实际扩增CT值不合理。

╯▂╰ PCR效率应在90-110%之间（3.6>斜率>3.1）。 有一系列变量会影响PCR效率。 这些因素包括例如扩增子长度、二级结构和引物设计。 虽然根据PCR原理，扩增效率在上述范围内，但对于一个反应周期，PCR产物扩增了两倍，即之前的两倍……N个周期的反应理论上应该是原反应的N次方。 此时，理论上的扩增效率为100%，即1。但实际上，由于酶、dNTPs，

什么是扩增效率？PCR是体外DNA扩增技术，通常需要30-50个循环。 在每个循环中，目标DNA分子的拷贝数将增加多达1倍。 然而，在实际反应中，PCR循环中每个步骤将DNA分子转化为一个扩增循环所需的时间取决于扩增片段的长度。 循环次数一般为20-45次，PCR扩增效率呈S型。平台出现的早晚与模板的起始量有关，也与引物二聚体、反应亚基等多种因素有关。