IP实验和WB实验的区别,免疫沉淀ip原理及步骤

IP实验和WB实验的区别,免疫沉淀ip原理及步骤

不同属抗体进行IP和WB实验1.使用交联剂DSS/HRP将一抗与ProteinA/G-beads共价偶联，然后进行免疫沉淀实验，省去了二抗的步骤。 2.选择仅与重链或轻链反应的二抗。 •如果目标蛋白被分割，研究人员习惯称WB为"形而上学"，因为它真的很容易引起问题！ 被WB折磨过的朋友们，看一下，我们为您准备了超详细的WB实验操作流程，还有PCR引物设计、RNA提取、免疫组织化学等入门性实验方案。

这种化学物质的固定化使蛋白质变性固化，这与自然状态下的蛋白质不同，但与WB中的热变性不同，成为线性结构。 因此，在做IF/IHC实验时，最合适的抗体可以利用抗原蛋白与抗体的特异性结合以及细菌蛋白的"蛋白A/G"与抗体的F片段（免疫球蛋白）特异性结合的现象所开发的方法。 ②IP分离原理3IP实验流程4IP实验实践

在WB和IP实验中，破坏细胞分选问题与选择和制备裂解缓冲液一样重要。 与一些软组织（如脑组织）相比，致密纤维组织（如肌肉组织）在制备WB或IP样品时需要更加坚硬。在免疫组化实验中需要固定组织或细胞。 保持细胞的形态结构与其自然状态一致，保证组织细胞抗原特异性的稳定性。 然而，化学物质的固定会使蛋白质变性，与自然状态不同。

IP实验抗体和后续WesternBlot实验所用的抗体源物种可以从不同的物种中选择。 如果IP抗体是小鼠来源的，那么后续的WB抗体可以是兔来源的。 5.单克隆抗体的选择。 一般单克隆抗体特异性强、背景低、亲和力强，可对目标条带进行灰度扫描，与内参条带的灰度值进行比较，以标准化数据。 绘制比率图。 IP=免疫沉淀（为了富集样品以避免抗体与原材料中其他物质之间的非特异性相互作用）