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设置复孔算重复实验吗 |
PCR可以只做2个复孔吗,一个复孔是几个孔
然后添加模板并在多个孔之间使用枪尖。 •先吸收少量液体并润湿(两次)以减少内部残留物。 •采用反向移液技术,即先按第二档吸出液体,移至孔时再移至第一档,这样就不会产生气泡。 •在MastePCR实验中,采集样品时不需要重复孔,但在p过程中至少应设置3个重复孔,并且实验应独立重复至少3次,这意味着您需要等待三批以上的RNA样品采集。 染色实验和组织样本必须来自至少3只动物。
ˋ0ˊ PCR反应需要引物与目标序列区域充分碰撞,因此如果只使用mRNA,PCR反应的起始量会大大减少。 通过计算,我们认为一次PCR反应5-10ng较为合理。 也就是说,一个样品最好设置3个重复的孔。同一个实验必须重复3次以上才可信。不同孔之间的差异不应大于0.4-0.5才有效,否则一定是由于加样过程造成的。 问题。
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∩▽∩ 孔有问题。要么是镜头被污染,要么是孔内有污染。如果可能,请重新进行ROX校准和仪器的空白校准。 单个样品通常需要3个技术重复(输入、IP、IgG-DNA)进行qPCR实验,计算每个重复孔的CT值,然后使用2-
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对的。首先qPCR不是很准,特别是对于新手来说。其次,三个平行以上才具有统计学意义,三个生物学重复以上才具有生物学意义。(发表文章时需要)最好能够设置3个复孔...
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基线:是指扩增曲线的⽔平部分。是指在PCR扩增反应的最初数个循环⾥,荧光信号变化不⼤。接近⼀条直线,这样的直线即是基线。每个样品孔都设置独⽴基线。阈值:是⼀个荧光强...
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Ct值的范围为15-35。Ct值小于15,认为扩增在基线期范围内,未达到荧光阈值。理想情况下,Ct值与模板起始拷贝数的对数存在线性关系,也就是标准曲线。通过标准曲线,扩增效率为100%时,计...
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目的基因平均Ct值-内参基因平均Ct值=ΔCt 步骤2:处理和对照样本比较 ΔCt处理样本-ΔCt对照样本=ΔΔCt 步骤3:使用公示计算 倍数变化=2-△△Ct 此公式用于计算所有待测样本与对照...
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