RIP实验IgG也会拉到RNA吗,RNA水平相关实验

RIP实验IgG也会拉到RNA吗,RNA水平相关实验

实际研究过程中所使用的蛋白质-核酸相互作用的实验技术各有不同，本期将从原理、应用场景和实验设计等方面重点分享几种蛋白质-核酸相互作用技术：CO-IP（蛋白质-蛋白质）、ChIP-seq/PCR（蛋白质-DNA）、CHI。如果对照的目的是确定IgG和目标抗体富集的非特异性mRNA的量，然后您可以找到确保不与目标抗体结合的RNA片段设计。 该引物用于qPCR检查IgG和目标抗体的背景。 右

∩△∩ 出来的核酸是与蛋白质结合的核酸。准确地说，是RNA，所以称为RIP。 RIP结果分析1RI结果分析27.RIP实验应用1.探索疾病模型中核RNA-蛋白质相互作用、细胞质RNA-蛋白质相互作用的调控机制。 ①核RNA-蛋白质相互作用②细胞质RNA-蛋白质相互作用2.Exploremi

3.加入RIPWashBuffer、0.5MEDTA、RNaseInhibitoronice。B.RNA结合蛋白免疫沉淀实验流程1.准备RIP免疫沉淀Buffer2.用氯仿、苯酚、异戊醇等从上一步中残留的RNA中提取RNA。 ;直接加入三唑、异丙醇、75%酒精、无水乙醇提取RNA。

说到RIP，就不得不提到它的合作伙伴RNAPullDown技术。 我们知道，RIP是从蛋白质开始研究蛋白质-RNA相互作用的技术，利用已知的蛋白质来验证可能存在相互作用的RNA分子；而RNAPulldown则是从RNA开始研究蛋白质和RNA。经过分离和纯化，复合物可以是RNA微阵列（RIP-chip）、定量RT-PCR或高通量测序（RIP-Seq）

如果我们仅在目标RNA的特异性结合中观察到富集信号，而不是在IgG对照中观察到富集信号，那么我们可以得出结论，这种RNA-蛋白质相互作用是特异性的。 通过在RIP实验中引入IgG对照，我们可以更好地理解RIP实验（RNABindingProteinImmunoprecipitationAssay，RNA结合蛋白免疫沉淀），它利用针对目标蛋白的抗体来沉淀相应的RNA-蛋白复合物，然后将其分离。 纯化可以检测与复合物结合的RN