做ip需要多少细胞,采集免疫细胞对身体有害吗

IP裂解液可以做什么实验 2023-09-02 20:35 449 墨鱼

IP裂解液可以做什么实验

做ip需要多少细胞,采集免疫细胞对身体有害吗

（一般每个IP样品需要200-500μl细胞裂解液，浓度约为1μg/μL。以下步骤以200μl细胞裂解液为IP为例）1.将200μl细胞裂解液加入20μlProteinA或ProteinGbeadslurry中，4℃旋转混合30-60miIP和COIP实验步骤1.细胞培养（贴壁细胞：100mm细胞培养物中80%-90%的单层细胞充满或细胞培养瓶中2-5×107个细胞悬浮。细胞：通过离心收集细胞，细胞达到2-5×107)；2 .加入1ml冰冷

Co-IP使用的细胞量比较大，在一定条件下最好能达到10的7次方，一般用10CM，可以根据自己的习惯选择不同的免疫沉淀实验。第一步处理样品非常关键！免疫沉淀实验本质上是抗原与抗体在自然构象状态下的反应，样品处理的质量决定了抗原抗体反应中抗原的质量、浓度和大小。

3.IP1.实验材料：抗体、磁珠2.抗体包被的磁珠（蛋白提取前）1）磁珠洗涤：2个1.5mLEP管中分别加入30μL磁珠，用PBS+0.5%Triton磁珠洗涤，磁力架磁分离，共洗涤本课题涉及ip常用的细胞数标准两个。在国际标准分类中，一般用于兽医、农业和林业相关的IP。在中国标准分类中，一般有多少个细胞用于动物检疫、兽药和疾病预防控制等领域。

免疫沉淀（IP）基本实验步骤：1）收获细胞，加入适量细胞IP裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂），裂解液或4℃30分钟，12,000g离心30分钟，取上清；2）取少量裂解样品。因此，需要准备>500mg和的动物组织细胞植物组织>2g样品用于Co-IP实验。样品采集后应快速冷冻并于-80°保存，避免反复冻融。然后利用特异性抗体捕获组织中的靶蛋白，形成抗体-靶蛋白复合物

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