pcr内参不齐有意义吗,pcr设置内参的作用

WB内参差多少才算齐 2024-01-08 18:46 318 墨鱼

WB内参差多少才算齐

pcr内参不齐有意义吗,pcr设置内参的作用

qRT-PCR现已成为比较不同样本间单基因表达水平差异的权威方法。然而，实验设计不当、控制和重复不充分、RNA样本质量低、反转录引物选择不理想、引物退火温度选择不利于qRT-PCR1。qPCR内控不完整可能是由于实验条件不稳定或试剂不纯造成。逆转录后确定MA浓度可能无法解决问题。建议检查实验条件，确保试剂纯度，并考虑使用

根据《临床分子生物学检测》第三版，常用的PCR内参一般采用与待测基因序列结构无关的"看家"基因，如B-肌动蛋白（B-actin）、3-磷酸甘油醛、氢化酶（GAPDH）等。这些基因的相对丰度可用于调整内参，比对后进行比较。内参一致性的主要原因是内参与真实数据必须一致才能具有可比性，并不意味着测量总RNA浓度或总蛋白浓度后，内参不一致就无法进行比较。

ˋ﹏ˊ 内参基因相当于标尺，具有修正功能，避免因待测样品回收率或采样误差等因素造成的差异；具有标准化功能，内参基因的表达量相对稳定，可以作为反映基因表达水平变化的参考。因为介绍首页社区精选商业合作视频上传创作者服务新闻中心关于我们社会责任加入我们中文干货|关于PCR参考基因选择#我日报#科学研究狗日报#博士生日报#实验室日报#qPCR发表于

这样，下个样本的相对内参就会是一样的（我说相对是指我不知道它们的既定质量和浓度是多少。2-3是可以接受的，不需要改变；反转录时Rna输入量就统一一下吧2019-09-17来自AndroidIP广东广东收藏）

(^人^) 2）PCR程序不合适，采用三步法反应，或优化退火/延伸温度。可适当降低退火温度；退火/延伸时间短（在推荐时间条件下可延长10秒）。 3）MgCl2浓度不合适。在提高镁离子浓度等PCR实验中，以内参作为基准来判断样品中目的基因的表达水平。如果内部参数不对齐，将会影响实验结果。

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