pcr异常曲线分析,pcr溶解曲线分析

PCR各种异常扩增曲线 2023-12-20 14:23 666 墨鱼

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1.PCR异常曲线分析在PCR实验中，我们经常会遇到各种奇怪的扩增曲线，如何正确解读这些曲线并做出适当的解决方案是我们一线实验人员需要练习的基本技能。今天，经过多年积累的PCR完成后，编辑发现反应体系中的液体减少（见下图2c），各荧光通道的扩增曲线呈对角线（见下图2a和2b），严重时造成实验室污染。 2.2.2常见原因：由于管帽封闭不严，反应液蒸发，管内体积减少。

＋ω＋结果：基线期间扩增曲线下降。可能原因：基线范围设置不当。建议：再次手动设置基线。 3.荧光信号采集结果异常：扩增曲线异常，出现锯齿状（或有熔解曲线但无扩增曲线）。可能原因：例如制作标准曲线时，荧光是否为梯度稀释标准，如果不是梯度稀释标准，可能会导致标准曲线放大效率或R2值异常；从冰箱中取出的试剂是否混合均匀。 ,如果药剂熔化后混合不均匀,则

⊙▽⊙ PCR中两个目的基因的扩增曲线呈线性。 02分析：如果出现这种情况，可注意检测后反应管内孔内标本的液位是否明显低于其他反应孔内的液位。这大部分是由于分装试剂时曲线1异常所致：PCR扩增抑制原因分析：H07有扩增抑制。解决方法：扩增前稀释样品（其影响）异常曲线2：自动基线设置问题原因分析：解决自动基线问题。

∩０∩ 异常曲线1：PCR扩增抑制原因分析：H07有扩增抑制。解决方法：扩增前稀释样品（可以通过稀释样品来消除抑制剂的影响）。异常曲线2：自动基线设置问题原因分析：自动基线问题目前，市场上一些荧光定量PCR预混液不含ROX。使用此类试剂时，应关闭ROX参考功能，否则可能会出现异常放大曲线，如图1左图所示。现象。遇到过这种问题

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标签： pcr溶解曲线分析