免疫荧光染色减少蒸发,免疫荧光非特异性染色原因

免疫荧光染色减少蒸发,免疫荧光非特异性染色原因

关闭水银灯，开启后至少等待15-30分钟；染色后立即观察标本，因为随着时间的推移，荧光会逐渐减弱。 如果标本在4°C下保存在聚乙烯塑料袋中，可以延迟荧光减弱时间并防止封固剂蒸发；使用的载玻片和其他载体必须较厚。关闭汞灯并等待至少15-30分钟，然后再对标本进行染色。 请立即观察，因为荧光会随着时间的推移逐渐减弱。 如果将标本保存在4°C的聚乙烯塑料袋中，可以延迟荧光减弱时间并防止封固剂蒸发。

i)染色：将DAPI工作液滴加到样品中，室温避光孵育适当时间。 ii)洗涤：用TBST缓冲液洗涤除去DAPI工作液，然后用TBS缓冲液洗涤3次。 iii)添加抗荧光衰减封片剂：最好不要强制细胞免疫荧光封片。 4.免疫荧光染色实验步骤1.冰冻切片固定：将切片从冰箱中取出，温热20-30分钟，用4%多聚甲醛固定30分钟，在脱色摇床上用PBS（PH7.4）摇匀洗涤3次。 每次5分钟。 2.抗原

(^人^) (4)组织切片预处理不当或石蜡切片使用不当，造成高背景染色；(5)图像采集过程不当，造成原始图像较差，直接影响后续半定量分析。 可见，无论荧光过强还是过弱，都会引起免疫荧光。免疫荧光经过冲洗、封闭、加一抗、冲洗、加二抗、冲洗、密封、显微镜检查。 所有的免疫荧光程序基本上都是基于这套程序。 我们先来说说洗，怎么洗？ 该溶液只需将载玻片浸入水中，在摇床上漂洗，然后洗涤三次。 不要害怕坠落

关闭水银灯，开启后至少等待15-30分钟；染色后立即观察标本，因为随着时间的推移，荧光会逐渐减弱。 如果标本在4°C下保存在聚乙烯塑料袋中，可以延迟荧光减弱时间，并可以防止封片剂蒸发。使用载玻片和其他载体时，关闭汞灯并打开至少15-30分钟，然后在染色后立即观察标本。 随着时间的推移，荧光会逐渐减弱。 如果将标本保存在4°C的聚乙烯塑料袋中，可以延迟荧光减弱时间并防止封固剂蒸发。

1、盖玻片处理、圆形盖玻片处理：将盖玻片用3%醋酸浸泡半小时，用洗衣粉清洗，用蒸馏水冲洗三次，然后用75%乙醇浸泡1小时以上。 在干净的工作台上用镊子取下盖玻片，并通过酒精灯的火焰将其烧毁。使用荧光标记进行后续实验。当使用甲醛固定时，在封闭液中添加0.3Mg甘氨酸以猝灭醛基引起的自发荧光。