平末端载体,平末端同聚物加尾怎么不平3

什么是平末端 2023-11-30 11:28 314 墨鱼

什么是平末端

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因此选择EcoRⅤ来切割loaderP；由于大肠杆菌DNA连接酶只能连接粘性末端，而T4DNA连接酶既可以连接粘性末端又可以连接钝端，从题意可以看出MT基因的末端是钝端，所以需要使用T4DNA连接酶将MT基因连接到载体P上，此时会添加尾部，这些小片段也会完成并产生一个Atail。由于这些片段比目标片段小，因此它们将首先连接到T向量。

当克隆平端靶片段时，为了获得最大量的"正确"连接产物，连接反应中载体和靶DNA的比例必须适当。每个重组体中外源DNA的连接方向和插入量必须通过限制性酶切图谱分析或其他方法来确定。去磷酸化的载体通过T4连接酶与消化后的DNA片段连接。载体的3'-OH与DNA片段的5'-P形成磷酸二酯键。载体的5'-OH与DNA片段的3'-P形成磷酸二酯键。 '-OH无法反应并留下缺陷，转移至大肠杆菌后需要修复

T载体的工作原理：大多数热稳定的DNA聚合酶都具有在进行PCR反应时在PCR产物的3'端添加一个"A"的特点（下图红框所示的位置）。因此，人们人为地在线性化平端载体的两端添加额外的T碱基，以便与PCR克隆产物的A端互补。，提高PCR产物连接和克隆的效率。 T载体的制备·商业化

当用酶切法停止制备线性化载体和插入片段时，如果得到的末端是钝的，那么插入片段与载体之间的连接不需要互补的碱基配对，只需要5'端的磷酸基团和3'端的羟基基团。平端载体连接试剂盒（含多个克隆位点）在T4DNA连接酶（T4ligasetechnology）作用下该试剂盒是一种先进的自杀基因阳性选择克隆系统，可以高效克隆平端PCR产物和任何具有平端的DNA片段。该试剂盒检测磷酸化或非

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