影响pcr扩增效果的因素有哪些,pcr扩增的特异性是由什么决定的

影响pcr扩增效果的因素有哪些,pcr扩增的特异性是由什么决定的

ˋ▽ˊ 1.影响PCR反应的因素：变性温度和时间：模板变性温度决定了PCR反应中双链DNA熔化的温度。如果未达到变性温度，则不会产生单链DNA模板，PCR也不会启动。 变性温度低，变性不完全，双链DNA是关键因素之一，模板越多越好。 6.dNTP：dNTP是PCR扩增体系中最不稳定的，反复冻融会导致NTP降解。 7.Mg2+：是TAQ活性所必需的，浓度过高或过低，反应都会受到很大影响。

许多因素会影响Mg2+的实际浓度，如TE中的EDTA、反应中使用的dNTP等，都会螯合Mg。温度：变性和退火温度是主要考虑因素。 变性温度太高（通常为90-94℃），时间太长（引物设计和合成目前只能在少数研究机构和技术实力较强的单位进行。临床应用时，只需购买PCR检测试剂盒即可进行工作。影响PCR自动热循环的因素很多。对于不同的DNA样本，PCR反应中会添加各种成分。

(2)引物扩增跨度：200-500bp为宜，在一定条件下可扩增至10kb的片段。 3）引物碱基：G+C含量应为40-60%。G+C太少，扩增效果不佳。G+C太多，易造成非特异性条带。PCR反应的影响因素包括以下几个方面。 :1.DNA模板的质量和纯度：DNA模板是否含有污染物、酶、RNA

上面讨论了影响PCR特异性的因素。 由此可见，影响PCR特异性的因素有很多，这里总结一下，供大家参考：①退火步骤的严格程度：提高退火温度可以减少杂交错配，从而提高特异性1.模板纯度，当蛋白质或其他杂质较多时，会在一定程度上影响PCR效率；2.模板量，模板量过高会降低PCR的特异性。PCR效率和特异性；3.引物，引物的长度需要在效率和特异性之间进行优化。

(=｀′=) 影响PCR扩增效率的因素有很多，包括引物、模板、反应体系、聚合酶等。 目前大多数实验室都使用PCR试剂盒，反应系统基本不存在问题。 鉴于凝胶不亮，判断扩增效率和产量不敢高，这一点非常明显！ 产量是指扩增后积累的产物量，可以通过分光光度计或电泳检测。 那么，影响PCR结果的因素有哪些呢？ 接下来，让我们从PCR的基础知识开始