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提取出的RNA怎样测浓度 |
测RNA浓度OD值,测rna浓度260280比值
答1:OD是吸光度的测量值。提取RNA后,需要测量提取的RNA的浓度。此时,需要取一些样品,稀释后测量OD260,将得到的OD值乘以稀释倍数,再乘以40μg/μl。 ,即适当稀释DNA/RNA溶液,使吸光度测量值与样品浓度的关系在线性范围内,然后根据原液总体积和稀释因子计算出溶液的总OD值。 例如,200μlDNA/RNA溶液,如果经过6
通过测量RNA在260和280nm处的OD比值,可以帮助确定其纯度。纯RNA样品的OD260/OD280约为2.0。 一般来说,测量OD值时,可控制在0-0.4之间。如果超过1,由于浓度太大,除了RNA浓度外,OD260/280和OD260/230也可以指示RNA的纯度:注:溶液的pH值会影响OD值的测量,如果溶解在纯水中,溶液会呈弱酸性,导致OD280至OD260/280以下。 02.荧光染色法(Qubitmeter)荧光染色
当naod值问题为0时,我们认为RNA中蛋白质或其他有机物的污染是可以忍受的。但需要注意的是,使用trisa缓冲液检测吸光度时,该值可能大于2。一般应为2。A230测定其他碳源物质,如酚类和糖类,机器测得的OD吸光度值不仅测量RNA的吸光度值,还可以测量RNA的吸光度值。还包括残留杂质、残留蛋白质、残留DNA的吸光度值,甚至降解的RNA都会导致OD值升高(这就是所谓的核酸增色作用)。 这些吸光度值均导致OD测量
ˋ▂ˊ OD值测量数据波长为260nm,误记为OD260。 如果样品是纯的,则可以使用OD260值来计算核酸样品的浓度。 1OD260相当于50μg/mL双链DNA,或30μg/mL(40μg/mL)单链DNA(RNA),或20μgRNA浓度的OD比值表示OD260/OD280=1.9~2.0,表明RNA占多数。 纯度已经很高了。 纯DNA:OD260/OD280≈1.8(>1.9,表示RNA污染;1.6,表示蛋白质、酚等污染)纯RNA:1.7
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