LC3染色法,镀银染色法

LC3染色法,镀银染色法

2)使用GFP-LC3融合蛋白在荧光显微镜下追踪自噬形成。 由于自噬体膜的形成需要LC3，因此可以通过标记LC3来识别自噬体。 3）荧光染色法用荧光染料染色组织切片或细胞观察自噬LC。3.免疫染色法检测宏观自噬是自噬体标记的常用方法。 原理LC3免疫染色法检测宏自噬的基本原理是宏自噬多由变性线粒体等较大物体诱导，且自噬结构较大。

＞▂＜ 1.染色特异性和灵敏度的测定方法(1)特异性染色和滴度测定。直接染色法中，滴度与相应抗原标本按1:2、1:4、1:8……等比例稀释。 采用"+"号荧光强度等一系列染色，通过MTT法、细胞凋亡分析及活/死染色法研究CeCe的体外抗肿瘤作用。 首先，CT26细胞的活力和完整性在光照射下不受影响，证实光对肿瘤细胞的影响可以忽略不计。 另外，Ce6inblack

ˋ﹏ˊ 2.3急性RIRI后视网膜LC3的表达采用LC3免疫荧光法检测急性RIRI后1d、3d、7d、28d及正常对照组RGCs自噬的激活情况。 正常对照组LC3免疫荧光染色（绿色）存在于RGCs层和内丛。qRT-PCR检测转染后细胞中LINC01268和miR-217mRNA的表达；双荧光素酶报告仪检测LINC01268和miR-217的表达。 靶向关系；CCK-8法检测细胞活力；流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡；

②细胞形态学检测——荧光染色法（Hoechst/DAPI）细胞形态的变化，如细胞膜皱缩、起皱、核染色质密度、细胞质浓缩等，可作为细胞凋亡的证据。 一般以核染色质的形态变化作为评价LC3-I的指标。通过Atg7和Atg3（分别对应E1和E2样酶）的类泛素反应，PtdEth(PE)偶联生成脂化形式。 LC3又称为LC3-II，可以附着在自噬体的膜上，是一个自噬体。

LC3-I和LC3-II之间仅存在2KD的差异。WB中请注意：建议使用高浓度分离胶（如15%）进行分离；转移时使用小孔径0.22um转移膜，70V湿转移1.5h，可用修护染色观察转移效果。 参考文献：ParzychKR，因此，当AnnexinVis与PI联合时，PI被排除在活细胞(AnnexinV-/PI-)和早期凋亡细胞(AnnexinV+/PI-)之外，而晚期凋亡细胞、凋亡细胞和坏死细胞则被FITC和PI同时染色。