pcr有条带但测序失败,菌液pcr正确但是测序不对

pcr有条带但测序失败,菌液pcr正确但是测序不对

⊙▂⊙ 也有菌落生长但菌落PCR中无明显条带，或测序结果为空或无信号的情况。 根据测序结果，如果有信号但不是组合质粒，则说明这是一个空载体。在同源重组过程中，它不会与目标片段结合。我不在乎是否有报道，但我的引物预计周一就可以准备好。 到达。 在继续之前我要休息一天。 经过四天的PCR，我发现它是

测序中间出现重叠峰（双峰）是因为序列前面有连续碱基或测序引物中的碱基缺失。 如果始终出现重叠峰，则说明序列本身存在非特异性条带，如果PCR扩增分析出非特异性条带，如果PCR条带较亮但测序无信号，建议尝试使用反向引物。 Theshit进行了排序。 或者对PCR产物进行TA克隆，然后进行测序，可以从根本上解决测序信号问题。

所有的条带都出现了，送这个PCR管测序，结果和目标条带一样，感觉连空气里都充满了我的目标条带brbr尝试过的解决办法br1，换试剂前我用过TBgreenVazymeMas前后：每个基因序列的长度各不相同，有的有几个bp，有的有几百个bp，但是我们设计引物的时候，只需要产物长度为80-300bp，如果太短或太长，则不适合荧光定量PCR检测。 产品片段太短，无法匹配引物二聚体区域

用单酶消化质粒，目标条带很轻（图1），然后用凝胶回收目标片段2017bp，浓度只有10ng/uL，然后进行PCR，退火温度58度，延伸2分10秒，35个循环。泳道如下（图2）这样的PCR产物可以送测序吗辛？ 或者是否添加更多的引物：引物的质量、引物的浓度以及两个引物的浓度是否对称都是PCR失败或扩增条带不理想、容易扩散的常见原因。 部分批次引物合成质量存在问题，两种引物其中一个浓度高，另一个浓度低。

生工生物提供7大类近万种生命科学产品和8项生命科学实验技术服务。 产品类别包括生化试剂、试剂盒、抗体、蛋白质、细胞、DNA合成、测序、基因合成和分子生物学实验技术服务。 应用领域涵盖分子生物学、细胞生物学1、引物设计不当：所选扩增序列与非靶标扩增序列具有同源性，因此在进行PCR扩增时，扩增的PCR产物是非靶标序列。 目标序列太短或引物太短，可能会导致误报。