HRP二抗浓度影响抗体效价吗,抗体效价与抗体浓度的关系

抗体效价测定 2024-01-08 20:12 117 墨鱼

抗体效价测定

HRP二抗浓度影响抗体效价吗,抗体效价与抗体浓度的关系

但如果二抗选择不好，可能会影响整个实验室或研究组。艾美捷科技建议二抗产品的选择不可忽视！艾美洁科技建议实验前将Abbkine的HRP标记山羊抗兔按1:100(v/v)稀释成溶液样品(如细胞裂解液或组织提取物)，并短暂涡旋加速溶解。

降低二抗浓度。 5）检测过程中，膜被干燥，以保证反应液充足，避免干膜现象。 6）曝光过度。缩短曝光时间。 7)抗体与封闭蛋白之间存在交叉反应。检查抗体与封闭蛋白之间的交叉反应。选择否答案：PVDF膜在转膜前没有被100%甲醇完全浸泡；洗膜不充分。可以增加洗膜次数。；封闭不完全，选择合适的封闭液并增加封闭时间；二抗浓度过高，降低二抗浓度；一抗特异性不强，使用特异性较强的抗体

检测抗体和相应二抗的浓度需要通过实验确定。背景过高的可能原因：背景一般在0.05左右。如果过高，可能是检测抗体或对应的二抗不具有特异性，导致非特异性结合；也可能是由于阻断；另外，减少HRP二抗的总和并加热灭活。采用副溶血弧菌（VPATCC17802）免疫新西兰白兔，制备多克隆抗体，采用间接酶联免疫吸附法测定抗血清效价，纯化后多克隆抗体效价为512,000。抗体

做WB时，一抗和二抗浓度如何确定？如何设置抗体滴度？一抗的量与样品中目标分子的含量有关。如果含量高的话，抗体不用太多，避免浪费，而且条带太亮，难以区分。我们的二抗是用5%脱脂奶粉稀释的，对结果没有影响。

二抗针对特定物种（如小鼠）的所有抗体，使用标记二抗就无需标记每个一抗，大大节省了时间和成本。二抗携带多种可检测标记，在此滴度范围内，斑点数量对样品浓度变化更加敏感，提高了检测结果的灵敏度。因此，根据本发明实施例的方法可以简单、准确、快速地检测巨细胞病毒中和抗体。

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